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        血清儲存以及解凍注意事項

        需要長期保存的血清必須儲存于-20℃ 至- 70℃低溫冰箱中,4℃冰箱中保存時間切勿超過一個月。

        由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱,必須預留定體積空間,否則易發生污染或玻璃瓶凍裂。


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        【▲反面案例】



         瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:

        1、-20℃ 至 -70℃ 血清低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天;

        2、然后移入室溫或者可以置于37℃水浴中,不斷搖動待全部溶解后再分裝。

        注意:

        1、在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與血清成分均一,減少沉淀的發生;

        2、切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉淀;

        3、若一次無法用完一瓶,無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。


        1)血清化凍為什么是渾濁的?

        血清制備過程中會保留部分纖維蛋白原,化凍過程中纖維蛋白原可轉化為纖維蛋白,使血清中出現渾濁,絮狀物。這種情況不影響血清的功效。

        血清化凍過程中,在37℃水浴中放置時間過長,也會導致沉淀產生,沉淀物包含磷酸鈣結晶。沉淀物也不影響血清功效。

        去除方法:

        可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g 稍微離心,將上清液加入培養基內一起過濾。也可直接過濾血清以去除這些絮狀物。

        2)血清熱滅活(除非必須,一般不建議作此熱處理)

        血清為何要滅活?

        血清熱滅活是將血清置于56℃水浴至完全解凍??蓽缁钇渲醒a體系統中具有蛋白酶活性的成分。補體是免疫系統的成分。對于那些培養困難的細胞、用于病毒檢測的細胞、用于細胞毒性檢測很重要,可避免補體帶來的不利影響。單熱滅活也破壞血清中的生長因子,所以除非必需,血清才滅活處理。

        啟動的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,啟動淋巴細胞和巨噬細胞活化。在免疫學研究、培養ES 細胞、昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。

        血清滅活的正確方法

        (1) 按照前面的介紹正確化凍;

        (2) 水浴預熱56℃。水量要足夠,水深要超過瓶中血清的高度;

        (3) 輕輕搖動已解凍的血清,置于水浴中,水位可能會下降;

        (4) 待水溫重新到56℃時,再計時30分鐘;

        (5) 從水浴中拿出血清,待冷卻。-20/-70℃存放。


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